Instrução Normativa nº1

Eritrograma: análise das células vermelhas presentes no sangue.

I. Confecção do hematócrito (%)

II. Contagem das hemácias (X10⁶/μL)

III. Dosagem de hemoglobina (g/dL)

I. Hematócrito (%)

Sangue c/ anticoagulante, Tubo capilar, Lamparina ou massa escolar.

a) Homogenizar o sangue no tubo de ensaio, é importante realizar este processo lentamente para não gerar ruptura das hemácias.

b) Colocar o tubo capilar em contato com sangue do tubo de ensaio, que entrará por capilaridade, estabelecer um nível até 2/3 do tubo capilar.

c) Limpar o tubo capilar por fora, e selar a parte sem sangue com a chama amarela da lamparina, ou utilizar massa escolar para vedar o tubo capilar. Quando realizada selagem com fogo, atentar para os seguintes cuidados:

c₁) não deixar a ponta selada torta, pois influenciará negativamente no valor do hematócrito;

c₂) não aquecer o tubo ao ponto de queimar o sangue, pois haverá ruptura das hemácias, influenciando diretamente no nível do hematócrito.

d) Levar para centrifugação pelo tempo de 5 minutos. Atentar para:

d₁) selar bem o t. capilar para evitar vazamentos no aparelho;

d₂) não forçar a tampa da centrífuga para não quebrar os tubos.

e) Após o processo de centrifugação o tubo capilar se apresentará em três faixas diferentes: plasma, hemácias e leucócitos;

f) Com Cartão de Leitura de Hematócritos – CLH, realizar a leitura no diagrama, onde a linha de cima é o limite do plasma e a linha de baixo é o limiar da faixa de hemácias.

II. Hemácias (X10⁶/μL)

Sangue c/ anticoagulante, Solução fisiológica, Pipetas Automáticas (10 μL e de 1000 μL) e Câmara de Neubauer (Hematocitrõmetro), microscópio e lamínula.

a) Diluir o sangue na solução fisiológico em 1: 200.

b) Colocar lamínula em cima dos quadrantes do hematocitrômetro.

c) Com a pipeta, colocar uma pequena alíquota da suspensão preparada, aguardar um minuto e iniciar a contagem.

d) Contagem é realizada da seguinte forma:

d₁) Na objetiva de 10x, focalizar o quadrante C e realizar contagem na diagonal. No quadrante (c) escolher dois lados, para realizar contagem, sempre imaginando um formato de “L”, desta forma evita-se a recontagem de lados semelhantes.

Fig. 1 Diagrama de Neubauer

d₂) No final soma-se todas as contagens dos 5 quadrados e multiplica-se este valor por 10.000.

III. Hemoglobina (g/dL)

Sangue c/ anticoagulante, kit enzimático para determinação de hemoglobina, espectrofotômetro.

Branco	Padrão	Teste
2500 μL RTH	2500 μL Padrão	10 μL Amostra de sangue 2490 μL RTH

Realizar leitura no espectrofotômetro e realizar a regra de três para quantidade de hemoglobina do padrão.

Quanto ao uso do espectrofotômetro:

a) ranhura da cubeta para o feixe de luz;

b) colocar o espectrofotômetro em absorbância (Abs);

c) zerar Abs e completar em 100 para transmitância;

d) limpar a cubeta antes da leitura para remoção das digitais

e) colocar o comprimento de ondas em 530 λ.