BANCADA: URÉIA CE (Labtest, 2008).

A Uréia CE é um sistema enzimático-colorimétrico para a determinação da uréia em amostras de sangue e urina, por reação de ponto final (fig. 1 e 2).

Fig. 1. Kit Uréia CE Labtest. 
A uréia é hidrolisada pela urease a íons amônio e CO2. Os íons amônio reagem em pH alcalino com salicilado e hipoclorito de sódio, sob a ação catalisadora do nitroprussiato de sódio para formar azul de indofenol.

Fig. 2. Kit aberto de Uréia CE da Labtest.

A intensidade da cor formada é proporcional à quantidade de uréia na amostra.

Espectrofotômetro com leitura em absorbância entre 580 a 620 nm.

Reagentes
1. Urease - Armazenar entre 2 - 8 °C. (fig. 3).
2. Tampão - Estoque - Armazenar entre 2 - 8 °C. (fig. 4).
3. Oxidante - Estoque - Armazenar entre 2 - 8 °C. (fig. 5).
4. Padrão 70 mg/dL - Armazenar entre 2 - 8 °C. Contém azida sódica. (fig. 6)

Fig. 3. Frasco n. 1 – Urease

Fig. 4. Frasco n. 2 – Tampão

Fig. 5. Frasco n. 3 – Oxidante

Fig. 6. Frasco n. 4 – Padrão

Amostra:

Usar soro ou plasma (fluoreto, oxalato, heparina, EDTA) e urina. Não usar anticoagulantes contendo amônia. A concentração de fluoreto na amostra não deve ser maior que 3 mg/mL pois o fluoreto em altas concentrações é inibidor da urease.
A uréia é estável no soro ou plasma por 12 horas entre 15 - 25 °C e vários dias entre 2 - 8 °C.
A urina de 24 horas deve ser colhida em frasco contendo 2,0 mL de HCl 50% e centrifugada antes de usar. Não utilizar formol como preservativo para a urina.

Preparo de Reagentes
Tampão de Uso (Frasco n. 2)
Adicionar o conteúdo do frasco nº 2 (100 mL) a 400 mL de água destilada ou deionizada e misturar. Estável 12 meses em frasco âmbar entre 2 - 8 °C.

Oxidante de Uso:
Adicionar o conteúdo do frasco nº 3 (25 mL) a 475 mL de água destilada ou deionizada e misturar. Estável 12 meses em frasco plástica entre 2 - 8 °C.

Urease Tamponada:
Adicionar 1,0 mL de Urease (nº 1) a 20 mL do Tampão de Uso. Estável 21 dias em frasco de vidro âmbar entre 2 - 8 °C.

Procedimento para urina
Para a dosagem de uréia na urina, diluir a amostra 1:50 (0,1 mL de urina + 4,9 mL de água
destilada ou deionizada). Multiplicar o resultado obtido por 50.

Tomar 3 tubos de ensaio e proceder como a seguir:

	BRANCO	TESTE	PADRÃO
AMOSTRA	----	0,01 mL	----
PADRÃO (n. 4)	----	----	0,01 mL
Urease Tamponada	1,0 mL	1,0 mL	1,0 mL

Misturar e incubar a 37 °C durante 5 minutos.

	BRANCO	TESTE	PADRÃO
Oxidante de uso	1,0 mL	1,0 mL	1,0 mL

Cálculos

Uréia (mg/dL) = (Abs. do teste / Abs. do padrão) x 70

Ex:

Abs. do teste = 0,269

Abs. do padrão = 0,610

Uréia (mg/dL) = (0,269 / 0,610) X 70 = 31 mg/dL

Ou pode-se obter pelo fator de calibração:

Fator de calibração = 70 / Abs. do padrão

mg/dL = Abs. do teste X Fator de calibração

Ex:

Fator = 70 / 0,610 = 114,8

Uréia (mg/dL) = 0,269 X 114,8 = 31 mg/dL

“ É IMPORTANTE RESSALTAR QUE NA HORA DA PROVA VOCÊ DEVERÁ FAZER A DILUIÇÃO ESPECÍFICA, OU SEJA SOMENTE A QUANTIDADE DE UREASE E TAMPÃO DE USO QUE VOCÊ IRÁ UTILIZAR, ISSO É FEITO DE FORMA SIMPLES, ATRAVÉS DE REGRA DE TRÊS.”

Lembre-se: Como o volume da amostra é pequeno, deve-se pipetar diretamente no fundo do tubo de ensaio realizando uma medição cuidadosa para minimizar problemas de imprecisão.

Precauções, cuidados especiais e interferências e mais detalhes no site da Labstest – http://www.labtest.com.br.